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BUNSEN熱訊:胎牛血清常見問題解答
Q: 應該如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?
A:建議血清應保存在-20°C。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。解凍時,建議將血清從冷凍室先移至2-8°C冰箱解凍,再放置于室溫進行解凍。請注意,解凍過程中需要經常搖晃混合。BUNSEN不推薦將FBS在37C長時間孵育解凍,胎牛血清。
Q: 熱滅活是必須的嗎?
A:實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。熱滅活過程中局部溫度過高,搖顯不均勻,滅活時間過長,都會造成血清品質下降。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!
Q: 如何進行血清的熱滅活?胎牛血清
A:滅活之前必須先搖勻解凍的血清并恢復到室溫
(1)取部分搖勻的血清 (50ML離心管) ,選用同規格的對照管一個。;
(2)對照管內放入與血清等體積的水:
Q: 培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎 ?
A:一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在2周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
(3)溫度預試:對照管內插入溫度計,顯示56°C時,將恢復到室溫的血清,放入水浴鍋。滅活過程中,經常輕輕晃動搖勻 (如: 每隔5MIN),保證溫度均一。
Q: 細胞培養中出現黑點是污染嗎 ? 如何處理?
A:一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何
變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸:
(2)配制培養基的 PH值偏高,不宜細胞生長:
(3)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除
(4)血清等級不足以維持細胞良好的生長。
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